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C57小鼠皮膚成纖維細(xì)胞原代培養(yǎng)的方法

實(shí)驗(yàn)方法1.將實(shí)驗(yàn)小鼠脫頸處死，75%乙醇浸泡5min，固定，備皮，取背部皮膚至于含雙抗的冷PBS緩沖液中。2.仔細(xì)剝離脂肪，血管等多余組織，PBS清洗，加胰酶消化1h。3.分離真表皮，去除表皮后，PBS清洗3次。4.將真皮部分于培養(yǎng)皿內(nèi)剪碎，加入適量胰酶，轉(zhuǎn)移至15ml離心管內(nèi)，37℃恒溫水浴消化1h。5.消化結(jié)束后，加入H-DMEM*培養(yǎng)基終止反應(yīng)，1000rpm離心5min，棄上清。6.PBS清洗一遍，離心棄上清。7.將清洗后的組織塊均勻鋪于6cm培養(yǎng)皿內(nèi)，加入2ml*...

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說說關(guān)于細(xì)胞外泌體研究的幾個(gè)重要問題

外泌體是細(xì)胞分泌到胞外的一種囊泡，其大小為30-150nm，具有雙層膜結(jié)構(gòu)和茶托狀形態(tài)，含有豐富的內(nèi)含物（包括核酸、蛋白和脂質(zhì)等），參與細(xì)胞間的分子傳遞。外泌體廣泛存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清以及各種體液中，細(xì)胞外泌體研究是近些年研究的熱點(diǎn)。細(xì)胞外泌體主要原理是根據(jù)外泌體的密度、粒徑、沉降系數(shù)和親和力等差異進(jìn)行分離，提取方法包括傳統(tǒng)的差速離心、密度梯度離心，以及后來發(fā)展的超濾法、聚合物沉淀法、免疫分離、隔離篩選法、體積排阻色譜法等。這些方法各有利弊。細(xì)胞外泌體研究常見問題：1、培養(yǎng)細(xì)胞...

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SD大鼠乳鼠心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞原代分離培養(yǎng)方法

1.將新生24h的SD大鼠用75%乙醇浸泡5min，開胸，取出心臟后于含有雙抗的預(yù)冷過的D-HANKS中漂洗兩遍，移入超凈臺(tái)。2.仔細(xì)剪除大血管，左右心房及右心室和室間隔，保留左心室，去除內(nèi)、外膜，PBS清洗。3.用眼科剪將心室肌剪碎至約1mm3，滴加1ml胎牛血清，均勻接種于6cm細(xì)胞培養(yǎng)皿內(nèi)，組織塊間隔1-2mm，放入5%CO2，37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。4.4小時(shí)后去除培養(yǎng)皿，加入3ml含有20%FBS和1%雙抗的H-DMEM培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)。5.一般情況下48小時(shí)后可見...

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新生SD大鼠大腦皮層神經(jīng)元原代分離培養(yǎng)方法

一.實(shí)驗(yàn)方法1.多聚賴氨酸（Poly-D-Lysine）包被培養(yǎng)板的制備：原代分離進(jìn)行前一天，用PBS緩沖液配制終濃度為0.1mg/ml的多聚賴氨酸工作液，0.22μm濾膜過濾除菌，于超凈工作臺(tái)內(nèi)吸取1ml加入六孔板內(nèi)，確保覆蓋板底，靜置孵育30min后吸出（可回收反復(fù)使用2-3次），用無菌水清洗培養(yǎng)板，置于超凈臺(tái)內(nèi)晾干，照紫外過夜。2.次日，取出生24h以內(nèi)的SD大鼠，75%乙醇浸泡消毒5min。3.棉球吸干乳鼠體表的乙醇，迅速斷頭，浸泡于冰冷的含有2%雙抗的PBS緩沖液中...

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原代細(xì)胞分離培養(yǎng)都有哪幾種方法？

研究中常用的細(xì)胞系/株系是現(xiàn)成的，我們只需要進(jìn)行細(xì)胞傳代和種子保存。然而，這些細(xì)胞系往往因長期體外培養(yǎng)而失去原有的生物學(xué)特性，對(duì)藥物治療的反應(yīng)差距越來越大。因此，越來越多的人選擇原代細(xì)胞。來源于胚胎、組織、器官和外周血，經(jīng)特殊分離方法制備的原代培養(yǎng)細(xì)胞稱為原代細(xì)胞。原代細(xì)胞培養(yǎng)，也稱為原代培養(yǎng)，是從供體獲得的組織細(xì)胞在體外的培養(yǎng)。原代細(xì)胞是接近和最能反映體內(nèi)生長特性的細(xì)胞，適用于藥敏試驗(yàn)、細(xì)胞分化等實(shí)驗(yàn)研究。原代細(xì)胞分離培養(yǎng)都有哪幾種方法？1、組織培養(yǎng)法組織培養(yǎng)是一種常見、簡(jiǎn)...

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充質(zhì)干細(xì)胞涉及的研究竟然這么多

充質(zhì)干細(xì)胞是人體內(nèi)一類具有自我更新和多向分化潛能的原始細(xì)胞群。根據(jù)遺傳來源的分類，干細(xì)胞可分為胚胎干細(xì)胞和成體干細(xì)胞。其中，胚胎干細(xì)胞具有發(fā)育全能性，是干細(xì)胞研究和應(yīng)用中具吸引力的一種。然而，關(guān)于胚胎干細(xì)胞的研究一直存在倫理爭(zhēng)議。與胚胎干細(xì)胞相比，成體干細(xì)胞具有獲取方便、致瘤風(fēng)險(xiǎn)低、無倫理爭(zhēng)議等優(yōu)點(diǎn)。因此，成體干細(xì)胞已成為干細(xì)胞臨床應(yīng)用研究的主要對(duì)象。在成體干細(xì)胞的許多臨床研究中，充質(zhì)干細(xì)胞是最多的。間充質(zhì)干細(xì)胞是一種來源于中胚層的成體干細(xì)胞，具有自我更新和多向分化的潛能。間...

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原代細(xì)胞分離培養(yǎng)有哪些注意事項(xiàng)？

原代細(xì)胞分離培養(yǎng)有哪些注意事項(xiàng)？1、組織塊培養(yǎng)法（1）接種后的前3天，觀察和移動(dòng)時(shí)注意不要引起液體振蕩。避免頻繁的翻倒和振動(dòng)，否則組織塊不易附著在瓶壁上或附著后脫落飄浮。（2）加入的培養(yǎng)基不宜過多，以免浸泡的組織因輕微波動(dòng)而脫落。（3）細(xì)胞向外遷移時(shí)，注意記錄并清除漂浮的組織塊和殘留細(xì)胞。它們產(chǎn)生的有毒物質(zhì)會(huì)影響原代細(xì)胞的生長。（4）為促進(jìn)組織塊盡快貼在培養(yǎng)瓶上，可在種植前在培養(yǎng)瓶底壁涂上一層薄薄的膠原蛋白。2、貼壁原代細(xì)胞（1）原代細(xì)胞分離培養(yǎng)的分離細(xì)胞一次接觸體外環(huán)境時(shí)，...

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充質(zhì)干細(xì)胞的醫(yī)療價(jià)值真的很高

充質(zhì)干細(xì)胞是一種早期未分化細(xì)胞，具有自我更新、自我復(fù)制、無限增殖和多向分化潛能等特點(diǎn)。它們可以分泌細(xì)胞因子，減輕炎癥，減少組織細(xì)胞凋亡，促進(jìn)內(nèi)源性組織器官干祖細(xì)胞的增殖，進(jìn)行免疫調(diào)節(jié)，從而達(dá)到作為種子細(xì)胞修復(fù)組織器官的效果。經(jīng)過連續(xù)傳代和冷凍保存后，仍具有多向分化潛能，被醫(yī)學(xué)界稱為“萬能細(xì)胞”。隨著研究的深入，發(fā)現(xiàn)充質(zhì)干細(xì)胞實(shí)際上是一組具有高自我更新能力和不同分裂增殖能力的多能干細(xì)胞。它們可以在體外培養(yǎng)和擴(kuò)增，也可以在特定條件下分化成神經(jīng)細(xì)胞、成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、肌肉細(xì)胞、脂...

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